Икона Богородице налази се у иконостасу параклиса Акатистна, дограђеном са леве стране главне цркве. Ова икона је направљена од воска и мастике и, према предању, дело је самог апостола Луке. Њу је, заједно са другим светињама, Патријарх Сергије носио на литији око зидина Константинопоља током његове опсаде 624. године, када је цар Ираклије био одсутан у војном походу против Персијанаца. Непријатељску флоту уништила је морска олуја, а град је био спашен захваљујући заштити Богородице; верници су обавили свеноћно бденије, током којег је патријарх читао Акатист. Цар Алексеј III Велики Комнин поклонио је икону ктитору манастира Дионисијата приликом њиховог сусрета у Трапезуду 1374. године. Икона је названа мироточивом, јер понекад испушта миро, чији се трагови назиру на њеној површини.
За време најезде пирата 1592. године, икона Богородице, заједно са другим светињама, украдена је из манастира. Међутим, на мору се подигла невиђена бура, и одмах се Богородица јавила вођи пирата и саопштила да икону треба одмах вратити у манастир. Када је вођа пирата отворио сандук у којем се налазила икона, увидео је да је она сва прекривена миром. Престрављени, пирати су вратили икону у Дионисијат, а двојица њих су остала у манастиру и примила монашки постриг.
1758. године, учитељ Атонске академије, архимандрит Јевгеније Вулгарис, овом иконом је излечен од страшне болести. 1767. године икону су по други пут украли иноверци, али су хришћани успели да је врате и превезу на острво Скопелос. Становници острва прво нису желели да врате икону представницима манастира, који су дошли да је покупе. Међутим, били су приморани тако да ураде, пошто је на острву избила епидемија.
За време великих празника икона се у литији носи од параклиса Акатистна до главне цркве манастира уз праћење звона манастирских звона. Док свештенство носи икону, монаси поју „Достојно Јест“. У главном храму икона се ставља на посебан престо, где остаје за поклоњење током суботе 5. недеље Великог Поста, када је празник Богородице, као и за време прослављања Светле седмице, у време Божића и на дан славе самог манастира.
У параклису Богородице Акатистне сваки дан се одржава божанствена литургија и поје се молебни канон.
Песма Пресветој Богородици је свима добро позната химна са главном темом човековог оваплоћења божанског кроз Богородицу. Ова химна је врста црквене поезије која је постала посебно популарна у петом и шестом веку. Аутор ове химне остаје непознат.
По својој структури, химна се састоји од 24 строфе, према броју слова у грчком алфабету; свака строфа почиње одговарајућим словом од Алфе до Омеге. Остале строфе почињу речју „Радуј се“.
Ова химна је један од најбољих примера византијске поезије. Она је инспирисала не само писање нових химни, већ и стварање икона и фресака, са приказом 24 строфе у сликарству. Ова химна увек помаже онима који страдају, не само у свакодневном животу, већ и у часу пред смрт, што се види из житија разних светитеља.
Нажалост, икона Богородице Акатист.jpg)
не је на многим местима оштећена услед испуштања мирисног уља - миро; ликови Богородице и Христа се готово не разликују.
Богородица из манастира Дионисијата је приказана у нежном загрљају са Младенцем Христом и припада типу иконографије Богородице Умиљење, познатом још из средњевизантијског периода.
Икона је обострано прекривена оквиром, направљеним 1786. године о трошку београдског митрополита Јеремије. На предњој страни, у доњем делу позлаћеног сребрног оквира, налази се натпис: „Молитва слуге Божијег Јеремије архијереја, 20. маја 1786. године“. На полеђини сребрног оквира приказан је пренос иконе од стране трапезундског цара Алексија III Великог Комнина ктитору манастира Дионисијата. Ову сцену прати натпис који описује историју иконе. Изнад главе цара може да се прочита натпис: „Алексије Цар Велики Комнин“, изнад ктитора манастира: „Свети Дионисије са Атоса“.
У 18. веку икона манастира Дионисијата је уметнута у другу икону, која приказује 24 строфе Акатиста. Овај део је украшен оквиром од сребра и злата, који је израдио монах Јосиф Неоскитиотис 1930. године, када је архимандрит Марко био игуман.
Пракса уметања једне иконе у другу позната је још из периода Палеолога (13. век) и настала је из жеље да се пажња усмери на посебно поштовану икону. У случају манастира Дионисијата, ово уметање је резултат жеље да се икона Богородице прати сликом од 24 строфе Акатиста. Сличан пример је и икона са иконостаса цркве Успења Пресвете Богородице на острву Милосу, где се чува таква „уметнута” икона Богородице Умиљење. На овој икони, на раму из 17. века, као и на икони манастира Дионисијата, постављене су строфе Акатиста, пророци са свицима и симболи који се односе на Богородицу.
